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Melhore a performance do seu ELISA


O ensaio de ELISA é provavelmente um dos protocolos qualitativos e quantitativos mais usados no mundo, sendo de simples execução, relativo baixo-custo e com excelente retorno em termos de dados. Entretanto, mesmo sendo um ensaio de execução relativamente simples, certos cuidados devem ser tomados:

Elementos a serem avaliados pré-ensaio:

  • Concentração esperada do seu analito (sensibilidade do kit e range da curva)

  • Tipo de leitor de placa (colorimétrico, quimioluminescente, etc…)

  • Tipo de kit a ser comprado (Completo? Alta Sensibilidade? )

  • Apresenta reação cruzada? Com quais moléculas?

  • Precisa de um kit auxiliar, no caso de kits compostos apenas pela curva padrão, estreptavidina-HRP, anticorpos de captura e detecção (nível de experiência com o ensaio)?

  • Especificidade correta do kit.

Diretrizes que devem ser sempre respeitadas:

  • Sempre, Sempre, Sempre seguir as orientações do fabricante (manual)!

  • Deixar todos os reagentes do kit e amostras que serão usadas, em temperatura ambiente antes de começar (30-45 minutos).

  • Durante o preparo dos reagentes, evitar a formação de bolhas.

  • Proteger da luz direta todos os reagentes, em especial os fotossensíveis (TMB).

  • Seguir boas práticas de pipetagem e usar pipetas adequadas e calibradas.

  • Seguir a tabela/figura dada no folheto de instruções para diluição da curva (praticamente todos os kits comerciais oferecem orientação para a diluição da curva padrão). Caso não seja adquirido kit auxiliar sugerido pelo fabricante:

  • Atentar-se para o BSA usado. Deve ser sempre de alto grau de pureza e livre de proteases e outras substâncias;

  • Seguir instruções do manual para preparo dos tampões e se possível. Sempre que possível, adquirir os reagentes auxiliares recomendados;

  • Sempre correr a placa com a CURVA PADRÃO em DUPLICATA!

Conte sempre com o Time de Suporte Pensabio para qualquer auxílio em sua pesquisa.

Conheça também os Diferentes tipos de ELISA.

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