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Controle de lâminas e sondas de controle para avaliar a técnica, a qualidade da amostra e a qualidade do RNA

 

O sucesso com qualquer ensaio começa com boas e consistentes práticas de controle de qualidade. O teste de hibridação in situ BaseScope ™ ® é um método baseado em ácidos nucléicos, no qual controles rigorosos podem ser facilmente incorporados em cada ensaio. A ACD recomenda dois níveis de práticas de controle de qualidade:

 

Verificação técnica de controle de qualidade - O BaseScope ™ Assay® é um ensaio fácil de um dia, similar no fluxo de trabalho à imunohistoquímica (IHC). A hibridao de ido nucleico altamente especica e sensel requer que o protocolo seja seguido atentamente. Para garantir a primeira vez e o sucesso contínuo na detecção específica do seu alvo pretendido com o BaseScope ™ Assay®, a ACD incentiva todos os usuários a realizar um controle de qualidade técnico para garantir que o ensaio seja realizado adequadamente. Esse controle técnico é feito facilmente usando uma amostra de controle de pellets de células testada em duas lâminas com uma sonda de controle positivo do gene de baixa cópia e uma sonda de controle negativo bacteriano inespecífica. Com a execução adequada do ensaio, os resultados mostrarão um forte controlo positivo da sonda e uma coloração limpa da sonda de controle negativo. Fazemos isso a cada ensaio para verificar se está sendo executado com a técnica correta.

 

Verificação do controle de qualidade da amostra / RNA - O ensaio BaseScope ™ tem condições universais de análise. Cada teste específico de alvo usa condições de hibridização idênticas. No entanto, variações na qualidade do RNA do tecido e nas condições de fixação geralmente ocorrem. Como resultado, é necessário ajustar as condições de pré-tratamento para a exposição e detecção de RNA ótima por BaseScope ™ ISH. Empiricamente, observamos que a grande maioria dos tecidos adequadamente fixados é adequada para detecção de RNA com BaseScope ™ ISH. A ACD oferece diretrizes sobre condições de pré-tratamento para certos tipos de tecidos. No entanto, encorajamos você a garantir que você tenha otimizado as condições de pré-tratamento para suas amostras de tecido antes de realizar suas experiências. Faça isso primeiro usando as sondas de controle positivas e negativas em seus tecidos para verificar se você tem sinal de controle positivo alto e nenhum controle negativo. Se o sinal estiver baixo ou se houver algum fundo, isso é mais frequentemente melhorado com ajustes nos tempos de pré-tratamento. Depois de estabelecer que a amostra e a qualidade do RNA são boas, você pode ter certeza de que os experimentos do BaseScope ™ ISH com testes específicos do alvo serão bem-sucedidos.

 

RNAscope® Control Slides for RNAscope® and BaseScope™ Assays

Control Probes for Manual Assays - BaseScope™ RED

 

Control Slides and BaseScope™ | ACD