PEAQ-ITC (Linha Microcal ITC)

April 16, 2020

 

Referência mundial em calorímetros de titulação isotérmica, os calorímetros da linha Microcal ITC, fabricado pela inglesa Malvern Panalytical, são utilizados para estudar uma ampla gama de interações entre macromoléculas. As aplicações variam do desenvolvimento de medicamentos à pesquisa fundamental em áreas como bioquímica, química medicinal e biofísica.
 

O microcalorímetro PEAQ-ITC, fornece medida direta, sem a necessidade de sonda ou marcador, e em solução, de todos os parâmetros termodinâmicos da ligação, e o melhor, em um único experimento! O PEAQ-ITC tem sensibilidade para investigar qualquer interação biomolecular usando apenas 10 µg de proteína! Além disso, o PEAQ-ITC é capaz de medir diretamente a constante de afinidade (KD) de milimolares a nanomolares (10-2 a 10-9 M).
 

Acredita-se que a exorribonuclease nsp14 desempenhe um papel crucial do tipo proof-reading, reparo e/ou recombinação para manter a integridade do genoma de RNA viral. A exorribonuclease do vírus SARS-CoV pertence à superfamília de exorribonuclease DEDD. As proteínas desta família compartilham um mecanismo catalítico comum, caracterizado pelo envolvimento de dois íons metálicos, no qual a exorribonuclease de SARS-CoV, nsp14, estava envolvida na replicação do vírus [1].
 

A primeira geração do Microcal ITC, VP-ITC, foi empregada para estudar os parâmetros termodinâmicos e de ligação entre cátions divalentes (Mg2+, Mn2+ e Zn2+) e a proteína nsp14, uma exorribonuclease codificada pelo coronavírus, causador da síndrome respiratória aguda grave (SARS-CoV) [2].

Os autores do estudo utilizaram análises de calorimetria de titulação isotérmica (ITC) para concluir que o mecanismo de ligação bimetálico rege a interação entre os íons metálicos e a nsp14; e a atividade dela requer como cofator o cátion divalente Mg2+. Por fim, a alteração conformacional induzida por íons metálicos possa ser um pré-requisito para a atividade catalítica da nsp14.

 

Encorajamos todo pesquisador brasileiro que se interesse em usar, os calorímetros da linha Microcal ITC (VP-ITC, ITC200 e PEAQ-ITC), para investigar a proteína exorribonuclease do vírus SARS-CoV-2, para entendimento do mecanismo de replicação do novo coronavírus.

 

Referências:
 

[1] Minskaia, E. et al. Discovery of an RNA virus 3'->5' exoribonuclease that is critically involved in coronavirus RNA synthesis. Proc Natl Acad Sci U S A. 2006; 103(13):5108-13 https://doi.org/10.1073/pnas.0508200103
 

[2] Chen, Ping et al. Biochemical Characterization of Exoribonuclease Encoded by SARS Coronavirus. Journal of Biochemistry and Molecular Biology, 2007; 40(5):649-655. https://doi.org/10.5483/BMBRep.2007.40.5.649.

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